Саженцы инвитро как вырастить
Размножение растений в культурах ин-витро (микроразмножение) означает способ размножения в искусственных, асептических условиях (в стекле). Представления микроразмножения является теория заложенная, когда каждая клетка растения покрытосеменных скрывает переданные через ядро и цитоплазму свойства, которые в определенных условиях делает возможным восстановление целого организма, отвечающему целому материнскому растению. Размножение ин-витро растений садовых, древесных, проходит примерно как растений зеленых, однако достижение свойств размножение является более сложным. В процессе розмнажения можно выделить четыре этапа.
Этап первый и второй. Оздоровление и размножение.
Материалом для размножения, используются растения свободные от болезней, зачастую с помощью термотерапии, после зимнего отдыха берут верхушечный побег растения. Стерилизацию поверхности проводят с помощью смеси из (50% алкоголя и 0,1% хлорки (хлорид ртути) ). Для размножения используют верхушечный побег 0,3-0,8 мм, для смеси чаще всего используют работы Мурашига и Кога, с добавлением цитокинина BAP (бензиламинопурина), стимулятора роста и образователя новых побегов. В первом этапе растения содержаться 3-4 недели, создаются несколько дополнительных побегов. Состав Мурашига и Кога таков: (в мг/л)
| NH4NO3 -1650 KNO3 -1900 CaCl2 * 2H20 -440 MgSO4 *7H20 -370 KH2PO4 -170 | Na2EDTA * 2H20 -37,2 FeSO4 * 7H20 -27,8 MnSO4 * 4H20 -22,3 сахароза -20 000 глицин -2,0 | гидролизат казеина — 1000 мезо-инозитол -100 кислота никотиновая -0,5 перидоксина-HCl -0,5 тиамин-HCl -0,1 |
Субтракция пробуждает рост и образование боковых побегов. Для получения хороших приростов размножения нужно использовать хорошие термично-освещенные условия. Интенсивность осветления должна быть около 1000 люксов (1000 люмий на квадратный метр), а температура воздуха от 21 до 25 градусов Цельсия саженцы одесса. Температура выше 30 гр приводит к быстому старению материала и уменьшению продуктивности.
Этап второй. Укоренение.
Для укоренения в пробирках используют молодое растения с хорошо образовавшимися листьями, длиной около 2 см. Для укоренения используют стимуляторы корнеобразования на основе ауксина.
Типы использования различных ауксинов (NAA, IAA или IBA) считается самым лучшим раствором с содержанием от 0,5 до 2 мг на литр раствора. Перебор укоренителя вызывает образование калиуса и затруднение образование корней. Хорошему укоренению растений способствует интенсивность света и уменьшение минеральных солей, добавление витаминов, B1, B2, B6, кислоты никотиновой и аскорбиновой.
Этап четвертый. Адаптация растений из пробирки в теплицу.
Этап этот является решающим при микроразмножении. Перенесение растений из стекла в теплицу означает изменение роста. Следует обеспечить им высокую влажность, требуемую температуру. Растения размножаемые в ин-витро следует защитить от паразитов, и скачков температуры. Грунт для посадки должен быть легким и свободным от болезней. Для субстрата лучше использовать торф верховой с необходимой кислотностью, освободить его от микроорганизмов можно с помощью термической обработки. Для дезинфекции лучше использовать фунгицид Топсин с добавлением Алиет. Рост растений можно ускорить с помощью опрыскивания препаратором цитокинина 0,5-2 мг на литр непосредственно по посадке, а второй этап можно повторить через две недели. Спустя 8 недель растения вырастают на высоту от 10 до 20 см, после этого их можно садить в питомник (однако не позже чем второй половины июля), или оставить их в теплице в горшках до второй половины весны.
Размножение растений в ин-витро, есть в практике несколько десятков лет. Большое значение в этом способе является быстрое размножение растений за короткое время, а также выращивание их без вирусов. С одной почки растения можно вырастить несколько тысяч растений.
Вы приобрели микрорастения в ООО «ЦБСР». Что делать с ними дальше?
Растения, размноженные по технологии «ин-витро», требуют специального ухода в течение первых одного-двух месяцев после покупки. Причина в том, что всю свою жизнь они росли в герметичных сосудах с постоянной 100%-ной влажностью, поэтому они не могут сразу приспособиться к условиям комнаты, теплицы или, тем более, открытого грунта. Резкий переход к этим условиям может оказаться для растений губительным, поэтому он должен быть постепенным. Процесс приспособления микрорастений к новым условиям внешней среды (адаптация) занимает обычно около месяца. Исключения составляют растения, которые уже прошли этап адаптации в лабораторных условиях (основной стандарт поставки). Порядок работы с растениями основного стандарта поставки следующий:
1) Приготовьте всё необходимое (емкость с раствором перманганата калия, пинцет, палочку, кассету с почвенной смесью, опрыскиватель с водой, нетканый материал) и только после этого приступайте к работе.
2) Палочкой (зубочисткой) сделайте углубление в почвенной смеси в кассете.
3) Откройте один контейнер с растениями. Запрещается открывать все контейнеры одновременно.
4) Пинцетом поместите растение в углубление в почвенной смеси в кассете, палочкой расправьте корни. Если корни слишком длинные, их можно подрезать скальпелем или лезвием. Присыпьте почвенную смесь к корням и палочкой или пальцами аккуратно обожмите вокруг корней.
5) Слегка опрыскайте распикированное растение водой и сразу же накройте куском лёгкого нетканого укрывного материала (Агрил, Спанбонд, Агротекс и т.п., плотностью 17 г/кв.м). Если этого не сделать, растения, высаженные первыми, могут необратимо увянуть за время, пока будут высажены все растения в кассете. Материал с растений можно будет убрать через 1-3 дня после посадки.
6) Обильно полейте распикированные растения из опрыскивателя.
7) Поливать растения лучше ежедневно и лучше – с помощью опрыскивателя.
8) Для получения полноценно развитых саженцев к осени текущего года, рекомендуется доращивание микрорастений в условиях парника или теплицы хотя бы в течение 1 месяца.
9) В случае, если адаптированные растения из кассеты пересаживаются в открытый грунт, необходимо (как и в случае с рассадой) притенить растения сразу после пересадки в открытый грунт и обеспечить защиту от возможных заморозков (даже если речь идёт о зимостойких видах).
К подкормкам растений можно приступать только после формирования новой мощной корневой системы, т.е, не ранее, чем через 1,5 — 2 месяца после пикировки. Подкармливать следует полным комплексным водорастворимым удобрением с микроэлементами, начиная с концентрации 0,5 г/л.
При первой зимовке растениям рекомендуется легкое профилактическое укрытие из хвойного лапника.
Нижеследующая информация актуальна только для тех покупателей, кто приобретает неадаптированные растения по отдельному заказу (для заказа таких растений необходимо связваться с ООО «ЦБСР» по электронной почте или по телефону и обговорить все детали заказа)
Технология адаптации микрорастений похожа на технологию выращивания рассады из предварительно выросших из семян сеянцев. В качестве емкости обычно используют кассеты или стаканчики, заполненные рыхлой почвенной смесью. Как правило, в качестве почвенной смеси применяют смесь торфа с перлитом. Иногда в эту смесь добавляют речной песок, дерновую землю, перегной, доломитовую муку и другие компоненты.
Универсального рецепта почвенной смеси не существует, главное, чтобы смесь была достаточно рыхлой, влагоёмкой, питательной и имела бы оптимальный уровень кислотности (при использовании верхового торфа возможна избыточная кислотность почвенной смеси).
Для большинства культур оптимальной считается слабокислая или близкая к нейтральной реакция. Если почвенная смесь слишком кислая или щелочная, это отрицательно влияет на процесс роста корней и поглощение ими тех или иных элементов минерального питания.
Приготовленную для посадки (пикировки) микрорастений почвенную смесь, как и при выращивании рассады из сеянцев или семян, желательно пропарить и (или) пролить раствором фунгицидов (препараты: Максим, Витарос, Превикур-энерджи и др.) для уничтожения патогенной грибной и бактериальной микрофлоры.
Помимо посадочных ёмкостей (кассет, стаканчиков или др.) для посадки микрорастений понадобятся: ёмкость с водным раствором перманганата калия (марганцовки) бледно-розового цвета для отмывания корней от остатков агар-агара, пинцет, небольшая палочка (зубочистка), опрыскиватель с водой, нетканый укрывной материал (Агрил, Спанбонд, Агротекс и т.п., плотностью 17 г/кв.м и 42-60 г/кв.м).
Если Вы приобрели растения в герметичном контейнере с агар-агаром, порядок работы следующий:
1) Приготовьте всё необходимое (емкость с раствором перманганата калия, пинцет, палочку, кассету с почвенной смесью, опрыскиватель с водой, нетканый материал) и только после этого приступайте к работе.
2) Палочкой (зубочисткой) сделайте углубление в почвенной смеси в кассете.
3) Откройте один контейнер с растениями. Запрещается открывать все контейнеры одновременно.
4) Извлеките пинцетом растение из агар-агара и отмойте его от остатков агар-агара в растворе перманганата калия. Если этого не сделать, на остатках питательной среды потом заведутся плесневые грибы и другая патогенная микрофлора, что может стать причиной гибели растений.
5) Пинцетом поместите растение в углубление в почвенной смеси в кассете, палочкой расправьте корни. Если корни слишком длинные, их можно подрезать скальпелем или лезвием. Присыпьте почвенную смесь к корням и палочкой или пальцами аккуратно обожмите вокруг корней.
6) Слегка опрыскайте распикированное растение водой и сразу же накройте куском лёгкого нетканого укрывного материала (Агрил, Спанбонд, Агротекс и т.п., плотностью 17 г/кв.м). Если этого не сделать, растения, высаженные первыми, могут необратимо увянуть за время, пока будут высажены все растения в кассете. Материал с растений можно будет убрать после того, как кассета поставлена в микропарник, либо через 1-3 дня после этого.
7) Поставьте кассету в «микропарник» — каркас, обтянутый плотным нетканым укрывным материалом (Агрил, Спанбонд, Агротекс и т.п., плотностью 42-60 г/кв.м). Если стоит солнечная погода, рекомендуется дополнительно притенить микропарник с солнечной стороны мешковиной, марлей, нетканым материалом.
8) Обильно полейте распикированные растения из опрыскивателя.
9) Плотно закройте микропарник. Если Вы заметили, что в микропарнике растения подвядают, необходимо слегка опрыскать их водой с помощью опрыскивателя.
10) Поливать растения лучше ежедневно и лучше – с помощью опрыскивателя.
11) После 2 недель пребывания растений в микропарнике (иногда – раньше или чуть позже, сигналом является появление у микрорастений новых листьев) необходимо постепенно, начиная с 5-10 минут в день, приоткрывать микропарник для постепенного снижения влажности. Отмирание старых листьев не является дефектом. Признаками ошибочных действий являются отмирание или непоявление молодых листьев и корней.
12) Обычно, через 4-5 недель после пикировки растения адаптируются к новым условиям внешней среды и более в микропарнике не нуждаются.
13) Для получения полноценно развитых саженцев к осени текущего года, рекомендуется доращивание микрорастений в условиях парника или теплицы хотя бы в течение 1 месяца.
14) В случае, если адаптированные растения из кассеты пересаживаются в открытый грунт, необходимо (как и в случае с рассадой) притенить растения сразу после пересадки в открытый грунт и обеспечить защиту от возможных заморозков (даже если речь идёт о зимостойких видах).
К подкормкам растений можно приступать только после формирования новой мощной корневой системы, т.е, не ранее, чем через 1,5 — 2 месяца после пикировки. Подкармливать следует полным комплексным водорастворимым удобрением с микроэлементами, начиная с концентрации 0,5 г/л.
При первой зимовке растениям рекомендуется легкое профилактическое укрытие из хвойного лапника.
Купить саженцы различных культур для садоводов сейчас не составляет никакого труда. Их можно заказать в Интернете и увидеть на местных рынках. Ассортимент и
диапазон цен очень широк, например, саженцы малины и ежевики можно найти по 5-7 грн, клубнику – по 2 грн, а за супер — новинки придется выложить несколько сотен гривен. Думаю,
многие садоводы, заказывая посадочный материал, оставались не довольными их качеством. Чтобы конкурировать и снизить цену на саженцы производители не редко упрощают
технологию, которую необходимо выдерживать на маточниках. В результате саженцы получаются слабые и болезненные.
Но садоводам и фермерам нужен качественный и здоровый посадочный материал за приемлемую цену. Выходом из ситуации может стать микроклональное размножение растений (in
vitro, дословно в стекле) – новая технология вегетативного размножения растений, позволяющая в ограниченные сроки получить большое количество идентичных копий (клонов) исходного
растения. Кроме непосредственно размножения, технология дает возможность избавиться от подавляющего большинства инфекций (вирусов, бактерий, грибов и т.д.), при условии соблюдения технологических
приемов. За счет этого, растения после in vitro размножения обладают значительно лучшими характеристиками (сила роста, продуктивность, устойчивость к болезням и т.д.) по сравнению с
исходными растениями. Такой посадочный материал относят к разряду супер-супер элиты.
Ответить на наши вопросы на тему «in vitro» любезно согласился Алексей Викторович — кандидат сельскохозяйственных наук с опытом работы с культурой тканей растений (микроклональное
размножение).
«Biznesselo»: Алексей Викторович, расскажите какие растения можно размножать ин-витро?
Во-первых, начнем с того, что немного развеем мифы и заблуждения. Технология микроклонального размножения растений (англ., in vitro microclonal plant propagation) – очень старый и широко
используемый во все цивилизованном мире метод быстрого размножения растительного материала. Первые протоколы сред для размножения были описаны физиологами растений Тошио Мурасиге и Фольке К.
Скугом еще в далеком 1962 году. В настоящее время практически весь посадочный материал заграницей получают при использовании в той или иной мере метода in vitro.
Во-вторых, по своей сути ничего особо мистического и загадочного в методе нет, за исключением самого громкого названия. Это просто еще один хорошо модифицированный способ обычного вегетативного
размножения, который позволяет в ограниченное время получить свободный от патогенов посадочный материал в больших или очень больших количествах.
Лаконично отвечая на Ваш вопрос – любые, с определенными ограничениями, связанными с особенностями роста тех или иных растений. Как правило, чем лучше растения размножаются в природе, тем выше
будет коэффициент размножения и в культуре in vitro.
«Biznesselo»: Какие основные этапы микроклонального размножения?
● введение в асептическую культуру (стерильные условия);
● адаптация (выведение из культуры in vitro) растений к условиям in vivo (обычным)
«Biznesselo»: Расскажите подробнее, как удается избавляться от бактерий, грибов и главное вирусов?
Во-первых, для введения в культуру in vitro используют точки роста растений, условно говоря, внутреннюю часть почки (апикальные меристемы), которые само растения защищает от патогенов. Во-вторых,
на начальном этапе части растений (экспланты) обрабатывают веществами убивающие большинство патогенов (соли сулемы, перекись водорода, спирт и т.д.). И, наконец, в-третьих, во время
культивирования и пересадки растений удаляются больные и зараженные бактериями и грибами.
Немного сложнее обстоят дела с вирусами. В этом случае или берут заранее здоровые от вирусов растения (проводят диагностику наличия вирусов методами молекулярной биологии, как при заболеваниях
человека) или избавляются от вирусов методом термической терапии.
«Biznesselo»: Какая примерно себестоимость саженца in vitro (например, малина, земляника, ежевика) сравнительно с посадочным материалом, который
был размножен традиционным способом?
Конечная цена определяется в основном ценами на энергоресурсы, стоимостью реактивов (химические соли и фитогормоны), поскольку растения длительное время “живут” в условиях искусственного
освещения на специальных твердых субстратах (агаризированной среде). В среднем, стоимость одного in vitro саженца превышает стоимость обычного в 1,5 – 2 раза. При этом следует учитывать
количество размножаемых растений, чем больше оборот, тем меньше себестоимость.
«Biznesselo»: Можно ли применять технологию ин-витро для получения новых сортов и видов растений?
Вопрос очень интересный. Одновременно и простой и сложный. Связано это со сложностью самого определения сорта. Как реально работающий в этой области молекулярный генетик могу однозначно сказать,
что описательная морфология как главный критерий при регистрации того или иного сорта растений – это очередная кормушка для нечестных людей. Вы, наверное, удивитесь, но очень многие сорта
это результат воровства друг у друга или вывезенные в кармане из-за границы растения, которые проявляют разные морфологические характеристики в других климатических зонах (в пределах
фенотипической изменчивости). Любые попытки ввести в госреестр элементы генетического контроля происхождения сортов, на сегодняшний день, обречены по понятным нам всем причинам.
Так вот, культура in vitro позволяет отобрать из большого числа клонов устойчивые к химическим соединениям, абиотическим факторам и т.д. растения. Будут ли эти клоны новыми сортами вопрос скорее
юридический, чем биологический.
Другое дело, что как составной элемент целого ряда направлений клеточной биологии, культура in vitro помогает получать новые виды, ранее в природе не существовавшие. Но это уже совсем другой
разговор.
«Biznesselo»: Возможны ли мутации при микроклональном размножении?
Теоретически – да. Но как показывает мой опыт, при соблюдении элементарной этики работы доля растений с измененным фенотипом, статистически ничтожна.
«Biznesselo»: Какая приживаемость у in vitro растений?
Все in vitro саженцы – растения с закрытой корневой системой. Приживаемость такого посадочного материала – максимально возможная.
«Biznesselo»: Правда, что растения размножены микроклональным способом, более устойчивы к болезням и неблагоприятным погодным
условиям?
Строго говоря, к абиотическим факторам – нет. С другой стороны любая устойчивость имеет полигенный характер, как проявления, так и наследования (работают одновременно много генов и их
взаимодействия определяются ответом на конкретные условия, т.е. не всегда линейно и последовательно). Другими словами, если Вы не подкормили на зиму растения и не укрыли незимостойкие, никакие
технологии не спасут от вымерзания. Но, если Вы все необходимые процедуры выполнили, то устойчивость оздоровленных растений будет выше. При этом никаких статистически достоверных подтверждений
такой устойчивости я привести не могу.
С патогенами ситуация более понятна: однозначно in vitro саженцы имеют конкурентные преимущества по сравнению с обычными. Они изначально здоровы, поэтому развиваются и плодоносят быстрее. А уже
взрослые растения (в зависимости от сортовых особенностей конечно) сами могут за себя “постоять”.
«Biznesselo»: Мы планируем заложить маточник малины и земляники. Какой класс растений вы бы посоветовали
использовать?
Здоровые и районированные. Как мне кажется, работы по закладке маточника нужно начинать не с растений, а анализа почвы и климатических условий. При этом любые агротехнические приемы способны
повышать урожайность. Например, для всех нам известного картофеля, удаление соцветий в стадии бутонизации способно повышать конечный валовый выход продукции до 10 %. То же самое относится и к
окучиванию, фумигации, корневым подкормкам и т.д. Я уже не говорю про предварительное выращивание сидератов как способа обогащения почвы и борьбы с сорняками.
Поэтому, для раскрытия генетического потенциала растения нужно создать оптимальные условия. Без серьезной предварительной работы выбор класса саженцов не имеет значения.
Источник статьи: http://5stihiynn.ru/sazhency-invitro-kak-vyrastit/