Проведение_лабораторных_исследований_при_грибковых_заболеваниях

Микробиологическая диагностика микозов Микроскопическое исследование

Микроскопия – это один из основных методов в лабораторной диагностике микозов. Проводить это исследование необходимо с того дня, когда на питательной среде появляются первые колонии. Перед микроскопическим исследованием необходимо знать является гриб дрожжевым или плесневым – по внешнему виду колоний, результатам проростковой пробы.

При микроскопии плесневых грибов учитывают структуру мицеллия (т.е. особенности строения гиф, их цвет, септированность; особенности строения конидиев и спор, включая размер, форму, цвет конидиев; строение их клеточной стенки, септированность и т.д.)

Для проведения микроскопии готовят нативные и окрашенные препараты. Для приготовления окрашенных препаратов материал обрабатывают различными способами:

1. Окраска PAS-методом. Использование РAS-метода позволяет выявить нейтральные полисахариды в стенках микроорганизмов. Нейтральные полисахариды – это глюкан-маннановый комплекс, находящийся в клеточной стенке большинства эумицетов, за счет него и происходит окрашивание.

PAS-реакции – один из методов микроскопической диагностики тканевых форм грибковой инфекции. В практических лабораториях для микроскопической диагностики используются различные модификации этого метода: окисление хромовой кислоты – реакция Бауэра; окраска по Гридли.

2. Окраска по методу Грама (модификация по Грам-Вайгерту) для выявления сопутствующих микроорганизмов.

3. Окраска по Циль-Нильсону для выявления кислотоустойчивых микроорганизмов. Если исследуемый материал жидкий, то из него готовят неокрашенный мазок для микроскопии в просветляющих жидкостях: смесь спирта с глицерином в соотношении 1:1.

Следующий этап это микологическое исследование – выделение и идентификация грибов. Рассмотрим особенности этого этапа в зависимости от исследуемого материала.

Микологическое исследование

Культуральное исследование. Культуральное исследование основано на выделение возбудителя из исследуемого материала. Сроки культивирования различны для разных видов грибов (от 2-4 дней до 4 недель), при подозрении на диморфные грибы культуру выделяют до 8 недель. Основными средами для культивирования в микологической лаборатории является среда Сабуро: декстрозный агар Сабуро (плотная среда), бульон Сабуро (жидкая среда). Для подавления роста бактериальной флоры в среду Сабуро добавляют антибиотики (хлорамфеникол, гентамицин, реже стрептомицин, пенициллин). Для подавления роста сапрофитных грибов в среду добавляют циклогексимид, хлорамфеникол. Существуют готовые среды с циклогексимидом (Mycobiotic Mycosel).

Оптимальным режимом культивирования для большинства патогенных грибов является 30 0 С, 20-25 0 С, реже 37 0 С – при подозрении на диморфные грибы. Длительность инкубации для большинства грибов составляет до 6 недель; если по прошествию этого времени роста не наблюдается, то дают отрицательный ответ. В случае подозрения на диморфный микоз при отсутствии роста в течение 6 недель, культуру выдерживают 8 недель и только после этого дают отрицательный результат.

При культуральном исследовании диагностически значимымявляются:

— выделение плесневого или дрожжевого гриба, при исследовании стерильного в норме материала;

— выделение диморфного гриба.

Алгоритм микологического исследования

1. Определение грибковой этиологии возбудителя (микроскопия).

2. Определяют дрожжевой гриб или плесневый:

— микроскопия клинического материала (наличия мицеллия);

— характер колоний на питательной среде, скорость роста (дрожжевые грибы растут 48 часов, плесневые грибы растут медленно).

3. Окончательную идентификацию гриба до уровня вида (внутривидовая) проводят с использованием биохимических тестов и иммунологических методов. При исследовании биохимических свойств изучают способность выделенной культуры к ассимиляции (ауксанограмма) и ферментации (зигограмма). Возможно использование автоматизированных систем идентификации (тест-системы для идентификации грибов).

Критерии этиологической значимости выделения условно-патогенных грибов

1.Если в нативном препарате видны только бластоспоры (сапрофитная вегетация) то это расценивается как носительство.

2.Если в нативном препарате преобладают бластоспоры и появляются единичные нити псевдомицелия, то это сигнал о переходе гриба к паразитизму.

3.Если бластоспоры единичные и преобладает псевдомицелий, то это признак глубоких органных поражений.

4.Активное почкование бластоспор – свидетельство острого процесса.

5.Количественную оценку результатов – выделение гриба из разведений

6.Повторность высеваемости одного и тогоже вида гриба

7. Наличие антител к выделенному штамму.

Микологическое исследование отделяемого слизистых

1. Подготовка материала. После забора материала со слизистых тампон помещают в 2 мл жидкой среды Сабуро или сусло-агара, или МПБ, разлитого в стерильные пробирки. Их тщательно встряхивают в течение 5 минут, стараясь не замочить пробку. Из полученной взвеси готовят ряд разведений 1:10 и 1:100 и т.д.

2. Культуральное исследование.

Из каждого разведения высевают по 0,1мл на 2 чашки сусло-агара, агара Сабуро или МПА. Посевы на плотных средах и пробирку с жидкой средой с тампоном для обогащения инкубируют при +37 0 С в течение 48 часов:

— после пройденного времени посевы просматривают и подсчитывают число колоний и ориентировочно определяют количество дрожжевых колоний. Их количество умножают на 20 и на разведение, из которого сделан высев;

— если на чашках с посевом, сделанным из разведений роста нет, то делают повторный посев из среды обогащения в чашку с сусло-агаром.

Микологическое исследование крови

1. Подготовка материала. После забора крови ее разводят 1:10, для того, чтобы бактерицидные свойства крови не ингибировали рост грибов.

2. Культуральное исследование.

— 5-10мл крови засевают в 50-100 мл жидкой среды Сабуро с 2% глюкозой. При температуре 37 0 С их инкубируют в течение недели;

— через 5 дней делают контрольный высев. Для этого стерильной пипеткой забирают осадок 3-4 капли из пипетки засевают на сусло-агар и растирают стерильной бактериологической петлей;

— засеянные чашки в течение 2-5 дней держат в термостате при 37 0 С;

— если обнаружен рост, то выдают предварительный ответ о фунгемии, а дальнейшую идентификацию гриба проводят в ходе исследования.

Микологическое исследование биоптатов

1.Для забора материала используют метод отпечатков.

2. Культуральное исследование:

— делают отпечаток исследуемым кусочком ткани на поверхность плотной питательной среды Сабуро;

— этот же кусочек ткани помещают в 50мл жидкой питательной среды (сусло или Сабуро);

— посевы инкубируют при 37 0 С в течение 5 дней.

Источник

Микроскопическое исследование на патогенные грибы (Detection of pathogenic fungi, Microscopic Examination)

Синонимы: Анализ кожи и ногтей на грибок; Грибковая инфекция ногтей и кожи. Pathogenic fungi: nails, skin; Microscopic examination for pathogenic fungi nails, skin.

Краткое описание теста «Микроскопическое исследование на патогенные грибы»

Грибковые заболевания (микозы) кожи и ногтей – заразные заболевания, передаваемые от человека к человеку, а также от животных к человеку. Передача инфекции может произойти при непосредственном контакте с активным очагом поражения, при использовании чужой обуви, а также в местах общественного пользования – банях, душевых, плавательных бассейнах. Проникновению инфекции способствуют повреждения целостности кожи (трещины, язвочки, опрелости и т. д.). Выявление структур грибов в пробах, взятых с пораженных участков кожи или ногтей, позволяет подтвердить наличие грибкового поражения. Дифференциация разных видов грибов в данном исследовании не производится.

С какой целью выполняют Микроскопическое исследование на патогенные грибы

Исследование предназначено для диагностики поверхностных микозов кожи и ногтей. Материал для исследования Проба ногтей с пораженного участка. Проба кожи и/или измельченных волос с луковицами с пораженного участка.

Правила подготовки к тесту «Микроскопическое исследование на патогенные грибы»

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Исследование назначают до начала проведения антигрибковой терапии. Внимание! Взятие материала проводит ТОЛЬКО врач-специалист. Взятие материала в медицинских офисах не проводится! Инструкция по сбору биоматериала .

В каких случаях проводят анализ «Микроскопическое исследование на патогенные грибы»:

Источник

Взятие соскоба с кожи и ногтей. Как правильно сдать анализ?

Грибы – это мельчайшие микроорганизмы, которые паразитируют на кожных покровах, слизистых оболочках, на волосах, под ногтями человека. И в определенных условиях они становятся источниками заболеваний (микозов). Чтобы вылечить грибковое поражение нужно установить вид возбудителя.

Что такое соскоб?

Грибковые (микотические) поражения стали настоящей проблемой. Все больше пациентов приходят на прием к дерматологу с запущенными формами заболевания. Взятие соскоба и дальнейший морфологический анализ позволяют поставить точный диагноз и провести своевременное лечение. Кроме диагностики грибковых заболеваний, соскоб кожи способен определить наличие папиллом, гемангиом и других предопухолевых и опухолевых новообразований.

Соскоб на грибок – это простая процедура по забору биологического материала для последующей диагностики грибковой инфекции. Манипуляция совершенно безопасна и не причиняет вред здоровью. Известно, множество заболеваний, вызванных грибковой микрофлорой. Самые распространенные по частоте – это кандидозы (поражение кожи и слизистых), онихомикозы (поражение ногтей), стригущий лишай, молочница и пр. По результатам анализа врач-дерматолог подбирает пациенту эффективную терапию.

Материал для исследования

Врач-дерматолог направляет пациента на взятие соскобов для того, чтобы уточнить диагноз. Для лабораторных исследований материал берется из пораженных участков. Материалы для анализа:

Измененные участки кожи или ногтей рассматривает врач-лаборант под микроскопом. Тщательный анализ позволяет отличить заболевания грибковой природы от других.

О процедуре

Соскоб с ногтя или кожи выполняют в медицинских учреждениях. Специалист с помощью скальпеля скоблит верхний слой эпителия. Соскобы с ногтевых пластин берут при помощи скальпеля, иглы или ножниц. Образцы забираются с самых поврежденных участков. При подозрении, что грибковое поражение распространилось на кожу вокруг глаз, для исследования берется несколько ресничек. Чтобы установить наличие микроскопических спор, для исследований берут маленькие чешуйки с кончиков ногтевых пластин.

Взятый образец помещается в стерильную пробирку, наполненную физиологическим раствором, или в специальный контейнер (эппендорф). Твердые роговые массы растворяют в специальных растворах, затем материал доставляют в медицинскую лабораторию для проведения микроскопических тестов.

Источник