Методы посева материала на питательные среды.
Бактериологический метод исследования — это выделение чистых культур микроорганизмов и изучение их свойств, т.е. их идентификация.
Материалом для посева могут быть культуры бактерий, пересеваемые с жидких и плотных питательных сред, различные выделения организма животных и человека, ткани, трупа, вода, почва продукты питания. Доставленный в микробиологическую лабораторию материал, подвергают бактериологическому исследованию в тот же день.
Жидкий материал для посева берут петлей или пипеткой. Пипетками пользуются в том случае, когда материал засевают в большом или точно отмеряемом объеме. Способ взятия плотного материала определяется его консистенцией. Чаще всего пользуются бактериальной петлей. Иногда материал может располагаться в жидкости неравномерно, образуя пленку или осадок. В этом случае нужно взять частицу пленки или крупинки осадка. При необходимости материал, взятый с бульонной культуры, эмульгируют. В зависимости от характера посевного материала, от цели исследования, используемой среды существуют разные методы посева.
Основное требование — оградить посев от посторонних микроорганизмов.
Посев из пробирки в пробирку с жидкой средой:
Применение в микробиологической практике:
1. Определение типа дыхания микроорганизмов.
2. Накопление микробной массы
Пробирки с посевным материалом и со средой держат наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами, так, чтобы края пробирок были на обычном уровне, а их основания находились поверх кисти. Пробирку с посевным материалом держат ближе к себе, в правой руке, как писчее перо, держат бактериальную петлю и стерилизуют ее. Мизинцем и краем ладони правой руки вынимают обе пробки винтовыми движениями одновременно. Края пробирок прожигают в пламени горелки. Прокаленную петлю охлаждают и, набрав немного материала, осторожно переносят в пробирку со средой. Петлю погружают в жидкость, материал растирают по стенке пробирки и смывают средой. После посева петлю извлекают из пробирки, края пробирок обжигают и, проведя пробки через пламя горелки, закрывают пробирки, после чего прокаливают петлю
Посев из пробирки в пробирку со скошенным агаром:
Применение в микробиологической практике: накопление микробной массы.
Пробирки с посевным материалом и со средой держат наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами, так, чтобы края пробирок были на обычном уровне, а их основания находились поверх кисти. Пробирку с посевным материалом держат ближе к себе, в правой руке, как писчее перо, держат бактериальную петлю и стерилизуют ее. Мизинцем и краем ладони правой руки вынимают обе пробки винтовыми движениями одновременно. Края пробирок прожигают в пламени горелки. Прокаленную петлю охлаждают и, набрав немного материала, осторожно переносят в пробирку со средой. Материал растирают по поверхности среды зигзагообразными движениями снизу вверх, начиная от границы конденсата. После посева петлю извлекают из пробирки, края пробирок обжигают и, проведя пробки через пламя горелки, закрывают пробирки, после чего прокаливают петлю.
Применение в микробиологической практике: выделение чистой культуры и определение подвижности у протея.
Пробирки с посевным материалом и со средой держат наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами, так, чтобы края пробирок были на обычном уровне, а их основания находились поверх кисти. Пробирку с посевным материалом держат ближе к себе, в правой руке, как писчее перо, держат бактериальную петлю и стерилизуют ее. Мизинцем и краем ладони правой руки вынимают обе пробки винтовыми движениями одновременно. Края пробирок прожигают в пламени горелки. Прокаленную петлю охлаждают и, набрав немного материала, осторожно переносят в пробирку со средой. Материал помещают в конденсат, который образуется между зеркалом среды и стенкой пробирки. После посева петлю извлекают из пробирки, края пробирок обжигают и, проведя пробки через пламя горелки, закрывают пробирки, после чего прокаливают петлю.
Посев из пробирки в пробирку «столбиком»:
Применение в микробиологической практике:
- Определение подвижности микроорганизмов.
- Определение протеолитической активности на желатиновых средах.
- Определение сахаролитической активности на полужидкой среде Гиса.
Пробирки с посевным материалом и со средой держат наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами, так, чтобы края пробирок были на обычном уровне, а их основания находились поверх кисти. Пробирку с посевным материалом держат ближе к себе, в правой руке, как писчее перо, держат бактериальную петлю и стерилизуют ее. Мизинцем и краем ладони правой руки вынимают обе пробки винтовыми движениями одновременно. Края пробирок прожигают в пламени горелки. Прокаленную петлю охлаждают и, набрав немного материала, осторожно переносят в пробирку со средой. Петлей с посевным материалом прокалывают столбик до дна, производя, так называемый посев «уколом». После посева петлю извлекают из пробирки под контролем глаза. Края пробирок обжигают и, проведя пробки через пламя горелки, закрывают пробирки, после чего прокаливают петлю.
Посев из пробирки в пробирку с комбинированной средой:
Применение в микробиологической практике:
- Определение сахаролитической активности.
- Определение протеолитической активности.
- Накопление микробной массы.
Пробирки с посевным материалом и со средой держат наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами, так, чтобы края пробирок были на обычном уровне, а их основания находились поверх кисти. Пробирку с посевным материалом держат ближе к себе, в правой руке, как писчее перо, держат бактериальную петлю и стерилизуют ее. Мизинцем и краем ладони правой руки вынимают обе пробки винтовыми движениями одновременно. Края пробирок прожигают в пламени горелки. Прокаленную петлю охлаждают и, набрав немного материала, осторожно переносят в пробирку со средой. Материал растирают по поверхности среды зигзагообразными движениями снизу вверх, начиная от границы конденсата. Затем петлей с посевным материалом прокалывают столбик до дна, производя, так называемый посев «уколом». После посева петлю извлекают из пробирки под контролем глаза. Края пробирок обжигают и, проведя пробки через пламя горелки, закрывают пробирки, после чего прокаливают петлю.
Посев во флаконы пипеткой:
Применение в микробиологической практике: санитарно-бактериологическое исследование воды.
Посев также, как в пробирки, только сначала материал набирают в пипетку, а затем открывают сосуд со средой и вносят материал.
Посев на среды в пробирки (жидкая среда, полужидкая среда, скошенный агар, комбинированную среду) с чашки Петри:
Применение в микробиологической практике:
- Накопление микробной массы на скошенном агаре.
- Определение сахаролитической активности
- Определение протеолитической активности на полужидкой желатиновой среде.
- Определение типа дыхания микроорганизмов на жидкой среде.
- Определение подвижности.
Выросшие на чашке Петри колонии изучают, выбирают те, которые необходимо исследовать дальше и обводят карандашом по стеклу со стороны дна. Затем чашку с материалом ставят перед собой крышкой вверх. Приоткрывают крышку и вводят под нее обожженную петлю. Остудив петлю, набирают посевной материал. Вынимают петлю, закрывают чашку и в левую руку берут пробирку со средой. Посев проводят также, как из пробирки в пробирку. После посева чашку переворачивают вверх дном.
Посев на чашку Петри шпателем:
Применение в микробиологической практике: выделение чистой культуры.
Левой рукой слегка приоткрывают крышку, держа ее большим и указательным пальцем. Петлей или пипеткой наносят на поверхность среды материал, после чего тщательно втирают его круговыми движениями шпателя до тех пор, пока шпатель не перестанет свободно скользить по поверхности среды. При этом левой рукой придерживают крышку и одновременно вращают чашку.
Внимание! Шпатель для работы берут стерильный и он разворачивается непосредственно перед посевом.
После посева вынимают из чашки и закрывают крышку. Стеклянный шпатель помещают в дезраствор, а металлический прокаливают над пламенем спиртовки.
Посев на чашку Петри петлей:
Применение в микробиологической практике: выделение чистой культуры.
Небольшое количество посевного материала втирают петлей в поверхность среды у края чашки, несколько раз проведя петлей из стороны в сторону (сброс). В месте, где закончились штрихи, агар прокалывают петлей, снимая избыток посевного материала (сброс материала). Оставшийся на петле посевной материал зигзагообразными движениями распределяют по всей поверхности среды, штрихообразными движениями от стенки до стенки. После посева закрывают чашку и прожигают петлю.
Посев на чашку Петри петлей на секторы:
Применение в микробиологической практике: выделение чистой культуры.
Чашку со стороны дна расчерчивают на секторы небольшое количество посевного материала втирают петлей в поверхность среды у края чашки, несколько раз проведя петлей из стороны в сторону. После того места, где закончились штрихи, агар прокалывают петлей, снимая избыток посевного материала (сброс материала). Оставшийся на петле посевной материал зигзагообразными движениями распределяют от края чашки к центру так, чтобы штрихи не заходили на соседний сектор. По окончании посева закрывают чашку и прожигают петлю.
Применение в микробиологической практике:
- Постановка антибиотикограммы.
- Проведение фаготипирования.
1 мл жидкой культуры (если культура с плотной среды, ее эмульгируют в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия или бульоне) наносят на поверхность агара и тщательно распределяют жидкость по поверхности среды, слегка вращая чашку. Затем чашку немного наклоняют и пипеткой отсасывают избыток культуры, выливая ее в дезинфицирующий раствор. Туда помещают пипетку, предварительно отсоединив от нее грушу.
Сосуды с засеянной культурой надписывают и помещают в термостат.
Источник статьи: http://cozyhomestead.ru/bolezni_2111.html
Техника посева микроорганизмов
Посевы из нативного материала чаще всего проводят пастеровской пипеткой, из культур микроорганизмов — бактериологической петлей или иглой в зоне пламени горелки. На культуральных сосудах (пробирки, чашки Петри, колбы и т.д.) пишут номер экспертизы, под кш рой зарегистрирован материал, дату посева.
Посев на жидкую питательную среду. Пробирку с исследуемым материалом и пробирку с питательной средой держат слегка наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами так, чтобы края пробирок были на одном уровне (пробирка с исследуемым материалом должна быть первой по отношению к работающему). В правую руку берут бактериологическую петлю (иглу или пипетку) как писчее перо. Пробки от пробирок прижимают мизинцем к ладонной поверхности правой кисти, в зоне пламени горелки пробирки открывают, края пробирок обжигают. Петлю вертикально прокаливают в пламени горелки. Простерилизованную петлю (иглу, пипетку) вводят через пламя горелки в пробирку с посевным материалом. Петлю охлаждают, забирают небольшое количество материала, переносят в пробирку со стерильной питательной средой. Материал стряхивают в среду или, слегка погружая в жидкость петлю, растирают посевной материал по стенке пробирки не касаясь среды держателем, после чего смывают его средой. Края пробирок и пробки вновь проводят над пламенем горелки, закрывают пробирки пробками, стерилизуют петлю и ставят ее в штатив или стакан. При посеве материала с помощью пипетки использованную пипетку опускают вниз концом в банку с дезинфицирующим раствором.
Посев на плотную питательную среду. Посевы выполняют разными способами. Эти способы основаны на том, что микроорганизмы иммобилизуются на поверхности или в глубине питательной среды.
Посев в пробирку. Материал, забранный петлей, опускают до дна пробирки со скошенным агаром, погружают в конденсационную жидкость и зигзагообразными движением петли проводят снизу вверх, слегка касаясь поверхности среды (посев штрихом). При посеве материала уколом в столбик среды, петлей с материалом или иглой прокалывают вертикально центру пробирки питательную среду, петлю или иглу вынимают, прожигают. (Правила работы с пробирками и петлей при посеве в пробирку с плотной средой аналогичны правилам при посеве на жидкие питательные среды).
Посев на чашку Петри. Чашку берут в левую руку, большим пальцем левой руки слег приподнимают крышку, чтобы в образовавшуюся щель свободно проходили петля или шпатель, обжигают на пламени горелки края чашки в зоне щели, вносят посевной материал на поверхность питательной среды, затем растирают его при помощи стеклянного шпателя или бактериологической петли.
1. Посев штрихом. Посевной материал втирают петлей в поверхность среды у края чаш избыток снимают, проколов агар. Оставшийся материал растирают параллельными штрихами по поверхности среды.
2. Посев петлей на секторы: дно чашки расчерчивают на секторы, посев производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру так, чтобы штрихи с одного сектора не переходили на другой.
3. Дробный посев: бактериологической петлей с посевным материалом несколько раз делают параллельные штрихи в одном секторе чашки Петри, петлю прожигают в пламени горелки, дают остыть и часть материала из первого сектора (А) распределяют во втором секторе (В) аналогичным способом, затем в третьем (С) и четвертом (Д) секторах.
Посев шпателем. Материал наносят на поверхность среды петлей или пипеткой, затем стеклянным или металлическим шпателем тщательно втирают по всей поверхности агара, вращая полуоткрытую чашку. После посева стеклянный шпатель помещают в дезинфицирующий раствор, металлический — прокаливают в пламени горелки.
Посев тампоном. Тампон с исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды, одновременно вращая тампон и чашку.
Посев газоном. 1 мл исследуемого материала (жидкая бульонная культура или взвесь микробов в физиологическом растворе) наносят пипеткой на поверхность среды и тщательно распределяют жидкость по всей поверхности чашки. Избыток материала отсасывают пипеткой и вместе с ней помещают в дезинфицирующий раствор.
Посев уколом. Посев уколом в агар столбиком (прямой агар) применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, так как рост по уколу типичен для ряда бактерий. Посев уколом в полужидкий агар практикуется также с целью длительного хранения культур. При посеве уколом в столбик желатина наблюдается разжижение ее бактериями, обладающими протеолитическим ферментом. Посев уколом в столбик питательной среды производят в пробирку со средой, застывшей в виде столбика. Пробирку берут в левую руку, как обычно, вынимают пробку и обжигают край пробирки, и в центре столбика питательной среды сверху вниз почти до самого дна пробирки вкалывают петлю с находящимся на ней материалом.
Источник статьи: http://studopedia.ru/10_277263_tehnika-poseva-mikroorganizmov.html