Цитопротекторный потенциал экстрактов клюквы, брусники, черники
Цитопротекторный потенциал экстрактов клюквы, брусники, черники / З. Т. Шульгау, А. М. Жуликеева, Шынгыс Даулетханулы Сергазы [и др.]. — Текст : непосредственный // Молодой ученый. — 2020. — № 18 (308). — С. 208-213. — URL: https://moluch.ru/archive/308/69392/ (дата обращения: 07.09.2023).
В статье изучены цитопротекторные эффекты полифенольных экстрактов клюквы, черники, брусники на клеточных культурах in vitro. Установлен полифенольный состав экстрактов клюквы, черники, брусники из северо-западного региона Западной Сибири, наибольшую концентрацию полифенольных компонентов определили для экстракта черники. Для всех экстрактов северных ягод выявлен в экспериментах in vitro цитопротекторный потенциал, зависимый от концентрации полифенолов.
Ключевые слова: полифенол, антиоксидант, цитопротектор.
Биологически активные продукты из ягод могут иметь терапевтическое значение и использоваться не только в комплементарной или альтернативной медицине, но и в медицине традиционной. Среди ягод, которые наиболее интенсивно исследуются, темно-окрашенные северные ягоды, а именно клюква, черника, брусника, занимают особое место, поскольку перспективы получения эффективных лекарственных препаратов или биологически активных пищевых добавок из них наиболее очевидны, судя по наличию большого количества доказательного материала в экспериментах и клинике [1].
Терапевтический потенциал северных ягод, а именно, клюквы, черники, брусники, связывают с уникально высоким содержанием полифенольных субстанций [2]. Известно, что полифенолы синтезируются растениями как вторичные метаболиты и предназначены, как защитные механизмы против стрессоров, включая различные патогены [3].
На основании анализа экспериментальных данных, описанных в доступной литературе, указывающих на вероятность высокого антиоксидативного и цитопротекторного потенциала для северных ягод и на возможность изменения течения ряда патофизиологических процессов на моделях возраст-ассоциированной патологии, была сформулирована следующая рабочая гипотеза. Полифенольные экстракты северных ягод (клюквы, брусники, черники) вследствие высокого содержания в своем составе полифенолов, способны обладать антиоксидантными и цитопротекторными свойствами, ограничивать проявления оксидативного стресса.
Целью исследования явилось изучение цитопротекторных эффектов полифенольных экстрактов клюквы, черники, брусники на клеточных культурах in vitro.
Материалы иметоды исследования
Водно-спиртовые экстракты были получены из ягод клюквы, черники, брусники, собранных в летне-осенний период 2015 года в Сургутском районе Ханты-Мансийского округа Тюменской области Российской Федерации. Для исследования были взяты как первичные экстракты ягод, так и их стандартизованные по фенольному числу версии. Водно-спиртовой экстракт концентрировали выпариванием в вакууме (7 g) в роторном испарителе с целью устранения спирта. Стандартизацию проводили по общему фенольному числу — 10 мг/мл.
Концентрацию полифенолов в образцах исследовали, используя коммерческий набор для определения концентрации полифенолов «Polyphenols folin-ciocalteu (ENOLOGY line by BioSytems. Spain)». Концентрации выражены в мг/л эквивалента галловой кислоты (gallic acid) на основе стандартной кривой, созданной по галловой кислоте. Общее количество мономерных антоцианов (anthocyanin, ANC) измеряли с помощью спектрофотометрического метода [4].
Анализ содержания фенольных соединений проводился методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием хроматографа Agilent 1290 Infinity. Идентификация фенольных соединений проводилась в соответствии с временами удерживания и спектрами поглощения соответствующих аналитических стандартов [5–7]. Количественная характеристика содержания индивидуальных соединений проводилась с использованием калибровочных кривых по соответствующим стандартным образцам.
Потенциальную цитотоксичность и вероятные цитопротекторные свойства экстрактов северных ягод оценивали в МТТ-тесте на первичной культуре альвеолярных макрофагов кролика и перевиваемой клеточной культуре НЕК293 (human embryonic kidney, АТСС® CRL-1573™) — клетки почки эмбриона человека.
После подсчёта клеток альвеолярных макрофагов кролика суспензию разводили культуральной средой таким образом, чтобы в конечном разведении число клеток в суспензии оказалось 1х10 6 /мл, после чего клеточную суспензию переносили в 24-луночные планшеты для культивирования по 1,0 мл в каждую лунку и инкубировали в СО2-инкубаторе при 37°С в течение 30 минут. После прикрепления макрофагов ко дну планшета исходную среду меняли на свежую тёплую среду (37°С), удаляя из культуры не прикрепившиеся посторонние клетки. В лунки вносили исследуемые соединения (0,1 мл): экстракты клюквы, черники и брусники в разведениях 1:10 и 1:100; доксорубицин в конечной концентрации 1 мкг/мл и 10 мкг/мл; доксорубицин 10 мкг/мл + экстракты клюквы, брусники, черники (разведение 1:100); контроль — клетки без добавления исследуемых субстанций (0,1 питательной среды). Инкубировали при 37°C в атмосфере CO2 (5 %) в течение 2 часов. Жизнеспособность клеток в контроле (клетки без добавления экстрактов) принимали за 100 %. Для каждой концентрации эксперименты были выполнены в трёх повторностях. Число экспериментов — 5 (взято было 5 кроликов).
Клетки НЕК293 выращивали в среде DMEM с добавлением 10 % эмбриональной телячьей сыворотки, 2мM L-глутамина, 1 % гентамицина при 37°C в атмосфере CO2 (5 %). Через 48 часов клетки сеяли в 96-луночный планшет в количестве 100 мкл клеточной суспензии на лунку (10 4 клеток в каждой лунке), помещали в СО2-инкубатор. К культуре клеток были добавлены тестируемые соединения (экстракты клюквы, черники и брусники в разведениях 1:10 и 1:100; доксорубицин в конечной концентрации 1 мкг/мл и 10 мкг/мл; доксорубицин 10 мкг/мл + экстракты клюквы, брусники, черники (разведение 1:100); контроль — клетки без добавления исследуемых субстанций), и далее клетки культивировали в тех же условиях 48 часов. Для каждой концентрации эксперименты были выполнены в трёх повторностях. Число экспериментов — 5 (в разное время использовано 5 образцов клеточной культуры).
Результаты исследований иих обсуждение
Концентрация полифенолов в экстракте брусники составила 8723 ± 304 мг/л, в экстракте клюквы — 4930 ± 152 мг/л, в экстракте черники — 17610 ± 811 мг/л. Полученные данные свидетельствуют, что наибольшая концентрация полифенолов присутствует в экстракте черники, несколько ниже в экстракте брусники и существенно меньше в экстракте клюквы.
Более детально состав полифенольных компонентов водно-спиртовых экстрактов черники, брусники и клюквы представлен в таблицах 1 и 2.
Состав фенольных соединений вэкстрактах северных ягод (черники, брусники, клюквы), мг/л
Фенольное соединение
Источник
Брусника, клюква, черника — лекарство от «всех» болезней
Всего лишь три ягоды, но каждая из них обладает потенциалом к излечиванию множества различных заболеваний организма.
Все три ягоды, пишет автор статьи на ресурсе Медикфорум , – это кладезь антиоксидантов и витаминов.
Черника
Черный цвет чернике придает большое содержание антиоксидантов, а они влияют на недоброкачественные опухоли на клеточном уровне – это отличная профилактика рака. Если есть ее регулярно, то здоровье и, в частности, память будут укрепляться. Кроме того при ее употребление усиливает иммунитет и уменьшает риск развития сахарного диабета второго типа, снижает уровень холестерина, предотвращает сердечные заболевания. Ее рекомендуют при инфекционных болезнях мочевого пузыря, при ревматизме, болезни желчного пузыря, печени. Также подходит для регуляции менструального цикла. Кроме всех перечисленных положительных качеств черника также дезинфицирует ЖКТ, улучшая микрофлору кишечника и предотвращая гнилостные процессы.
Читайте также
Жизнь с чистого листа: как повлияет на все знаки зодиака Черное Новолуние 30 мая
Брусника
Бруснику рекомендуют при гастрите с пониженной кислотность и повышенном давлении. Ее также рекомендуют во время простуды, слабости, болях в голове и запорах. При повышенной температуре отличным жаждоутоляющим средством может послужить морс из брусники. Кроме прочего употребление брусники обладает антисклеротическим эффектом: укрепляются стенки сосудов и сердце, также снижает уровень плохого холестерина. Брусника имеет противоязвенные свойства, помогает выводить токсины и соли тяжелых металлов. Она будет особенно полезна людям преклонного возраста, людям с хронической усталость.
При простуде или общей слабости, головных болях принимают напиток из брусничного сока. Сок разбавляют кипяченой водой один к трем и добавляют мед.
Клюква
Клюкву используют для лечения простуды, с ее помощью снижают жар и снимают воспаления, также клюква – отлично подходит для профилактики заболеваний, так как усиливает защитные функции организма. При ее употреблении укрепляются капилляры и уменьшаются воспалительные процессы. Для лечения ревматизма, сахарного диабета, гипертонии, ретинопатиях, полиомиелите, вирусном гепатите, нефритах, болезнях кожи тоже рекомендуют клюкву. Также обладает противоопухолевым действием. Протертая с медом клюква – при атеросклерозе.
Ранее 5-tv.ru рассказывал, что исследования показали, что на запах тела влияет не только соблюдение гигиены, но и качество пищи.
Источник