Техника посева микроорганизмов
Посевы из нативного материала чаще всего проводят пастеровской пипеткой, из культур микроорганизмов — бактериологической петлей или иглой в зоне пламени горелки. На культуральных сосудах (пробирки, чашки Петри, колбы и т.д.) пишут номер экспертизы, под кш рой зарегистрирован материал, дату посева.
Посев на жидкую питательную среду. Пробирку с исследуемым материалом и пробирку с питательной средой держат слегка наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами так, чтобы края пробирок были на одном уровне (пробирка с исследуемым материалом должна быть первой по отношению к работающему). В правую руку берут бактериологическую петлю (иглу или пипетку) как писчее перо. Пробки от пробирок прижимают мизинцем к ладонной поверхности правой кисти, в зоне пламени горелки пробирки открывают, края пробирок обжигают. Петлю вертикально прокаливают в пламени горелки. Простерилизованную петлю (иглу, пипетку) вводят через пламя горелки в пробирку с посевным материалом. Петлю охлаждают, забирают небольшое количество материала, переносят в пробирку со стерильной питательной средой. Материал стряхивают в среду или, слегка погружая в жидкость петлю, растирают посевной материал по стенке пробирки не касаясь среды держателем, после чего смывают его средой. Края пробирок и пробки вновь проводят над пламенем горелки, закрывают пробирки пробками, стерилизуют петлю и ставят ее в штатив или стакан. При посеве материала с помощью пипетки использованную пипетку опускают вниз концом в банку с дезинфицирующим раствором.
Посев на плотную питательную среду. Посевы выполняют разными способами. Эти способы основаны на том, что микроорганизмы иммобилизуются на поверхности или в глубине питательной среды.
Посев в пробирку. Материал, забранный петлей, опускают до дна пробирки со скошенным агаром, погружают в конденсационную жидкость и зигзагообразными движением петли проводят снизу вверх, слегка касаясь поверхности среды (посев штрихом). При посеве материала уколом в столбик среды, петлей с материалом или иглой прокалывают вертикально центру пробирки питательную среду, петлю или иглу вынимают, прожигают. (Правила работы с пробирками и петлей при посеве в пробирку с плотной средой аналогичны правилам при посеве на жидкие питательные среды).
Посев на чашку Петри. Чашку берут в левую руку, большим пальцем левой руки слег приподнимают крышку, чтобы в образовавшуюся щель свободно проходили петля или шпатель, обжигают на пламени горелки края чашки в зоне щели, вносят посевной материал на поверхность питательной среды, затем растирают его при помощи стеклянного шпателя или бактериологической петли.
1. Посев штрихом. Посевной материал втирают петлей в поверхность среды у края чаш избыток снимают, проколов агар. Оставшийся материал растирают параллельными штрихами по поверхности среды.
2. Посев петлей на секторы: дно чашки расчерчивают на секторы, посев производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру так, чтобы штрихи с одного сектора не переходили на другой.
3. Дробный посев: бактериологической петлей с посевным материалом несколько раз делают параллельные штрихи в одном секторе чашки Петри, петлю прожигают в пламени горелки, дают остыть и часть материала из первого сектора (А) распределяют во втором секторе (В) аналогичным способом, затем в третьем (С) и четвертом (Д) секторах.
Посев шпателем. Материал наносят на поверхность среды петлей или пипеткой, затем стеклянным или металлическим шпателем тщательно втирают по всей поверхности агара, вращая полуоткрытую чашку. После посева стеклянный шпатель помещают в дезинфицирующий раствор, металлический — прокаливают в пламени горелки.
Посев тампоном. Тампон с исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды, одновременно вращая тампон и чашку.
Посев газоном. 1 мл исследуемого материала (жидкая бульонная культура или взвесь микробов в физиологическом растворе) наносят пипеткой на поверхность среды и тщательно распределяют жидкость по всей поверхности чашки. Избыток материала отсасывают пипеткой и вместе с ней помещают в дезинфицирующий раствор.
Посев уколом. Посев уколом в агар столбиком (прямой агар) применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, так как рост по уколу типичен для ряда бактерий. Посев уколом в полужидкий агар практикуется также с целью длительного хранения культур. При посеве уколом в столбик желатина наблюдается разжижение ее бактериями, обладающими протеолитическим ферментом. Посев уколом в столбик питательной среды производят в пробирку со средой, застывшей в виде столбика. Пробирку берут в левую руку, как обычно, вынимают пробку и обжигают край пробирки, и в центре столбика питательной среды сверху вниз почти до самого дна пробирки вкалывают петлю с находящимся на ней материалом.
Источник статьи: http://studopedia.ru/10_277263_tehnika-poseva-mikroorganizmov.html
Методика посева «газоном».
Ориентировочная карта основ действий
Практического занятия №8.
Тема: «Посев культур микроорганизмов и биологического материала на питательные среды».
План:
Обучение технике посева микроорганизмов и исследуемого материала на жидкие, полужидкие и плотные питательные среды:
а) бакт. петлей на плотную питательную среду в чашку Петри;
б) бакт. петлей на сектора плотной питательной среды в чашку Петри;
в) бакт. петлей на скошенную поверхность плотной питательной среды;
г) бакт. петлей методом укола в глубину столбика полужидкой питательной среды;
д) бакт. петлей в жидкую питательную среду в пробирку;
е) бакт. петлей на поверхность плотной питательной среды методом «бляшки»;
ж)тампоном в жидкую и плотные питательные среды;
з)шпателем на плотную питательную среду;
и)пипеткой методом «газона».
Задание № 1.
Ознакомьтесь с инструкцией для проведения практического занятия.
Задание № 2.
Изучите общие правила посева исследуемого материала на питательные среды:
1. Бактериологические посевы — это манипуляции, включающие нанесение (внесение) петлей, пипеткой или другим инструментом содержащего бактерии материала на (в) питательные среды с целью выделения чистой культуры, ее накопления, хранения, определения многообразных свойств. Посевы должны проводиться таким образом, чтобы достигнуть поставленной цели (например, получение изолированных колоний) и в то же время предупредить возможность контаминации посевного материала и питательных сред микробами окружающей среды, а также заражения людей и контаминации окружающих объектов микробами, находящимися в посевном материале.
2. Посевы бактериологические производят в спецодежде, в специальных боксах и лабораториях, содержащих минимальное число микробов, около пламени горелки, стерильными инструментами в стерильные среды и при строгом соблюдении других условий асептики.
3. Перед проведением посевов необходимо оборудовать рабочее место, добавив к стационарному оборудованию исследуемый материал, инструменты, питательные среды, которые предварительно подписывают (номер исследуемого материала и дату посева).
Задание № 3.
Изучите технику посева с помощью бактериальной петли на плотную питательную среду в чашку Петри:
1. Пробирку с посевным материалом держат слегка наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами.
2. В правой руке держат бактериальную петлю, как писчее перо, и стерилизуют ее в пламени спиртовки.
3. Четвертым и пятым пальцами и краем ладони правой руки вынимают из пробирки пробку.
4. Края пробирки обжигаютв пламени спиртовки.
5. Прокаленную петлю вводят через пламя спиртовки в пробирку с посевным материалом, охлаждают петлю о внутреннюю стенку пробирки, (или погружая ее в конденсационную жидкость) и, набрав немного материала (одну петлю), осторожно вынимают из пробирки со средой, не касаясь ее стенок и краев.
6. Удерживая чашку Петри со стерильной питательной средой на ладони левой руки, слегка приоткрываем ее крышку большим пальцем.
7. Вводим петлю с посевным материалом под крышку и делаем штрихообразные движения петлей, начиная от края чашки и заканчивая на расстоянии 2 см, — площадка для сброса материала.
8. В месте окончания штриха агар прокалываем петлей, снимая избыток материала, и далее засеваем оставшуюся поверхность агара штрихообразными движениями от одного края чашки к другому.
9.Чашку закрываем. Петлю прожигаем.
Задание № 4.
Сделайте посев чистой культуры микробов петлей «штрихами»на 4 сектора чашки Петри с средами Эндо, Левина, предварительно разделив чашку на 4 сектора, (проведя со стороны дна чашки стеклографом две взаимно-перпендикулярных линии) и подписав чашку.
Внимание!Все надписи на чашках Петри делают со стороны дна!
1. Прожигаем петлю.
2. Удерживая чашку Петри со стерильной питательной средой на ладони левой руки, слегка приоткрываем ее крышку большим пальцем.
3. Вводим петлю под крышку чашки, остуживая ее о внутреннюю стенку чашки Петри.
4. Забираем петлей часть изолированной колонии. Чашку закрываем.
5. Вносим посевной материал на поверхность стерильной питательной среды в 1 сектор, приоткрыв крышку чашки Петри. Петлей делаем штрихообразные движения в направлении от периферии к центру сектора.
6. Повторяем п.5 при посеве в каждом секторе. Движения по секторам производятся по часовой стрелке.
7. Чашку закрываем. Петлю прожигаем.
Изучите технику посева бульонной культуры бактериальной петлей на 2 сектора плотной питательной среды в чашке Петри
Методика посева та же, что и при выполнении задания № 4 (посев на 4 сектора), только при посеве на 2 сектора чашку не расчерчивают, а засевают материал на поверхность половины среды параллельными штрихами, затем чашку поворачивают и посев второй половины среды делают перпендикулярно уже совершенному посеву.
Внимание!При посеве бульонной культуры (или жидкого материала) петлей избыток материала не снимается!
Задание № 6.
Сделайте посев культуры бактерий петлей на 2 сектора плотной питательной среды в чашке Петри
Изучите технику посева бактериальной петлей на скошенный МПА.
На чашке Петри с плотной питательной средой отбирают типичную изолированную колонию, обводя ее стеклографом со стороны дна чашки.
1. Чашку Петри берут в левую руку, а петлю — в правую; петлю фламбируют в пламени спиртовки; открывают крышку чашки и вводят туда обожженную петлю, охлаждают ее о внутреннюю поверхность крышки; набирают посевной материал (не более 
части колонии).
2. Вынимают петлю, закрывают чашку и ставят ее в кювету, а в левую руку берут пробирку со скошенной средой.
3. Вынимают пробку, обжигают края пробирки, вводят петлю с материалом в пробирку до конденсата и делают посев по поверхности среды зигзагообразными движениями снизу вверх, начиная от границы конденсата.
4. Петлю выводят из пробирки, обжигают ее края и закрывают пробкой, затем фламбируют петлю.
Задание № 8.
Сделайте посев культуры бактерий, выращенной на пластинчатой среде в чашке Петри, на скошенный МПА, предварительно подписав пробирку со средой.
Изучите технику посева бактериальной петлей методом «укола» в столбик полужидкой (плотной) среды.
1. См. пункты 1 задания № 7.
2.Вынимают петлю, закрывают чашку и ставят ее в кювету, а в левую руку берут пробирку со средой, залитой «столбиком».
3. Открывая пробирку, правой рукой зажимают пробку , и обжигают горлышко пробирки.
4. При посеве «уколом» бактериальной петлей с посевным материалом делают прокол среды с поверхности, не доходя 3-4 мм до дна пробирки.
5. Петлю извлекают, горлышки пробирок прожигают в пламени горелки. Пробирки закрывают пробками.
Пробирку рекомендуется держать дном вверх, чтобы не наступила контаминация среды воздушной микрофлорой.
Задание №10.
Сделайте посев чистой микробной культуры на среду Гисса, предварительно подписав пробирку со средой.
Задание №11.
Изучите технику посева с помощью бактериальной петли из пробирки в пробирку:
1. Пробирку с посевным материалом и пробирку со средой держат слегка наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами так, чтобы края пробирок были на одном уровне, а их основания находились поверх кисти. Обычно пробирку с посевным материалом держат ближе к себе.
2. В правой руке держат бактериальную петлю, как писчее перо, и стерилизуют ее в пламени спиртовки (горелки) трехкратно.
3. Четвертым и пятым пальцами и краем ладони правой руки вынимают из пробирок обе пробки одновременно.Извлекают пробки не рывком, а плавно: легкими винтовыми движениями.
4. Вынув пробки, края, пробирок обжигаютв пламени спиртовки.
5. Прокаленную петлю вводят через пламя спиртовки в пробирку с посевным материалом (культурой), охлаждают петлю о внутреннюю стенку пробирки, (или погружая ее в конденсационную жидкость) и, набрав немного материала (одну петлю), осторожно переносят в пробирку со средой, не касаясь стенок и краев пробирок.
6. При посеве в жидкую среду петлю с посевным материалом слегка погружают в жидкость (бульон), материал растирают на стенке пробирки и смывают средой.
7. После посева петлюизвлекают из пробирки, края пробирок обжигают и, проведя пробки через пламя спиртовки, закрывают пробирки; после этого прокаливают петлю.
1.Не забывайте выполнять правила личной безопасности при работе с заразным материалом.
2. Следите, чтобы жидкая среда, не вылилась и не смочила пробку!
Задание №12.
Сделайте посев чистой культуры кишечной палочки в пробирку с МПБ, предварительно подписав пробирку с МПБ (ниже уровня пробирки написать регистрационный номер и дату посева).
Задание № 13.
Изучите технику посева бактериальной петлей методом «бляшки»
См.1-4-ый пункты задания № 11.
1. Прокаленную петлю вводят через пламя спиртовки в пробирку с посевным материалом (культурой), охлаждают петлю о внутреннюю стенку пробирки, (или погружая ее в конденсационную жидкость) и, набрав немного материала (одну петлю), осторожно переносят в чашку со средой.
2.Петлю с посевным материалом вводят под крышку чашки Петри и, слегка прижав ее к поверхности среды, делают круговые движения до тех пор, пока диаметр «бляшки» составит 0,8-1,0 см.
3.Отступив 1,5 см от сделанной «бляшки» и повернув петлю другой стороной (поверхностью), аналогично засевают вторую «бляшку».
Внимание! С одной петли можно засеять только 2 «бляшки»!
Задание № 14.
Сделайте посев чистой культуры на сектор чашки Петри с МПА петлей методом «бляшки».
Задание № 15.
Изучите метод посева исследуемого материала шпателем.
1. Берут стерильный шпатель.
2. Стерильной стеклянной палочкой или петлей извлекают материал из пробирки, фламбируя края пробирки до забора материала и после. Пробирку ставят в штатив.
3. Левой рукой слегка приоткрывают крышку чашки Петри со средой Эндо и переносят посевной материал с палочки (петли) на поверхность среды, чашку закрывают, продолжая держать в руке.
4. Правой рукой берут стерильный шпатель.
5. Открыв чашку, подводят шпатель к капле материала так, что бы она растеклась по ребру шпателя.
6. Материал тщательно втирают круговыми движениями по всей поверхности питательной среды, а левой рукой при этом удерживают крышку и одновременно вращают чашку.
7. По окончании посева шпатель вынимают из чашки и закрывают крышку. Шпатель помещают в дез. раствор. Посевы инкубируют при 37°C 24 часа.
Задание №16.
Отработайте технику проведения посева патологического материала (испражнений в глицериновой смеси) шпателем на чашку Петри со средой Эндо или Левина.
Задание № 17.
Изучите технику посева исследуемого материала тампоном на плотную питательную среду в чашку Петри.
1. Осторожно, не касаясь горлышка пробирки, извлекают из нее тампон с материалом.
2. В правой руке удерживают пробирку с тампоном, в левой руке — чашку Петри.
3. Приоткрыв чашку, вводят на поверхность агара тампон, делая им штрихообразные движения у края агара. Это так называемая площадка для сброса материала.
4.Чашку закрывают. Тампон помещают в дез. раствор.
5. Материал, оставленный на площадке для сброса, распределяют штрихообразными движениями стерильной петлей или ребром шпателя по оставшейся части агара.
6. Чашку закрывают. Петлю фламбируют (шпатель погружают в дез. раствор).
Задание №18.
Отработайте технику проведения посева патологического материала тампоном.
Задание № 19.
Изучите метод посева исследуемого материала «газоном».
Методика посева «газоном».
1. 1 мл. жидкой культуры (если культуру берут с плотной среды- ее эмульгируют в стерильном физиологическом растворе, вносят последний в количестве 5-7 мл. в пробирку с культурой) наносят на поверхность агара в чашку Петри при помощи стерильной пипетки (микробную культуру всасывают с помощью груши).
2. Тщательно распределяют жидкость на поверхности среды, слегка покачивая чашку Петри в руках или вращая ее по столу.
3. Затем чашку слегка отклоняют от себя и этой же пипеткой, которой вносили культуру в чашку, отсасывают избыток культуры, выливая его в дезинфицирующий раствор, туда же помещают и пипетку.
4. Посев «подсушивают» в термостате, приоткрыв чашку Петри, в течение 10-15 минут, затем чашку закрывают, переворачивают вверх дном и инкубируют при 37°C 24 часа.
Примечание: Посев «газоном» используется при:
1. постановке пробы чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с помощью бумажных дисков;
2. обнаружении фага на плотных питательных средах (фагодиагностика и фаготипирование).
Задание № 20.
Отработайте технику проведения посева «газоном», взяв в качестве материала бульонную культуру микроорганизмов.
Задание № 21.
Поставьте все чашки Петри и пробирки в штативе со сделанными посевами в термостат для инкубации при + 37°С на 24 часа.
Внимание! Чашки Петри с посевами ставят в термостат вверх дном и не более 2-3 чашек одна на другую, (чтобы обеспечить равномерный прогрев посевов)!
Задание № 22.
Запишите в дневник методики посевов.
Задание № 23.
Заполните таблицу: укажите известные вам способы посева и применяемые при этом инструменты.
| методы посева на среды | |||
| в чашках Петри | в пробирках | ||
| со скошенным агаром | в столбик агара | с бульоном | со средой, залитой столбиком и «косяком» |
Вопросы для закрепления
1. Каковы общие правила посева исследуемого материала на питательные среды?
2. Расскажите о технике посева с помощью бактериальной петли из пробирки в пробирку.
3. Какова техника посева бактериальной петлей «штрихами» на 4 сектора плотной питательной среды в чашке Петри?
4. Расскажите о технике посева бульонной культуры бактериальной петлей на 2 сектора плотной питательной среды в чашке Петри.
5. Какова техника посева бактериальной петлей методом «укола» в столбик полужидкой (плотной) среды?
6. Как произвести посев культуры на сектор чашки Петри петлей методом «бляшки»?
7. Каковы условия инкубации бактерий — аэробов и бактерий — анаэробов?
8. Перечислите инструменты, используемые для посева материала в жидкие питательные среды.
9. Назовите инструменты, используемые для посева материала на плотные питательные среды.
10. Какие правила безопасности необходимо выполнять при посевах?
11. Как осуществляется метод посева «газоном»? Для чего он используется в практической медицине?
12. Расскажите о технике посева исследуемого материала шпателем. К какому методу посева (качественному или количественному) он относится?
13. Как называют методику посева исследуемого материала тампоном в бульон?
14. Расскажите о технике посева материала тампоном на плотную питательную среду в чашку Петри.
15. При каких перечисленных способах посева можно получить рост изолированных колоний?
16. Какие методы посева способствуют сплошному росту культуры на питательной среде?
Домашнее задание: Учебник Ф.К. Черкес, с. 107-109
Источник статьи: http://poisk-ru.ru/s24974t9.html